合成肽及雜質的高效方法開發(fā)
發(fā)布時間:2025-07-03 閱讀次數(shù)：34次
合成肽類藥物在生產中易產生缺失肽和氧化雜質，這些雜質因結構相似性和保留行為接近，傳統(tǒng)色譜方法開發(fā)需人工測試多種分離條件，耗時長。島津方法開發(fā)系統(tǒng)和LabSolutions MD方法開發(fā)軟件的組合，通過“篩選-優(yōu)化-驗證”全流程自動化，實現(xiàn)效率提升。本文以一種合成肽FLP及其相關雜質(5種不同序列：p.A1del、p.A1_E2del、p.A1_K3del、p.A1_D5del、Met(O2)）為例，分享如何實現(xiàn)合成肽及雜質的高效方法開發(fā)。
方法開發(fā)系統(tǒng)
分析條件
色譜系統(tǒng)：Nexera X3 (Method Scouting System方法開發(fā)系統(tǒng))
色譜柱（6根）：Shim-pack Scepter C18-120(1.9μm,3.0x100mm)；GISS C18(1.9μm,3.0x100mm）；Velox SP-C18(1.8μm,3.0x100mm)；Scepter C8(1.9μm,3.0x100mm)；Scepter Phenyl(1.9μm,3.0x100mm)；GIST HP C18-AQ(1.9μm,3.0x100mm)
水相（4種）：0.1%三氟乙酸水溶液；0.1%甲酸水溶液；10mmol/L甲酸銨（pH=4）水溶液；10mmol/L乙酸銨（pH=5）水溶液
有機相（3種）：乙腈；甲醇；乙腈:甲醇=1:1；
質譜系統(tǒng)：LCMS-2050(其他條件略)
01第一階段：72組條件一鍵篩查，省時省力還輕松
島津方法開發(fā)系統(tǒng)硬件+軟件的組合，只需簡單5步即可一鍵創(chuàng)建批處理，通過切換閥實現(xiàn)72組（6×4×3）條件連續(xù)自動穩(wěn)定運行，整套系統(tǒng)會在分析結束之后，自動量化數(shù)據(jù)并圖形化展示所有色譜圖，便于使用者快速判定。
智能評分系統(tǒng)：按分離度總分=峰數(shù)量×∑各峰分離度自動排名，根據(jù)色譜圖和評估值快速得出最佳參數(shù)。以下是不同色譜柱以及檢測條件色譜圖及數(shù)據(jù)評估值：
最佳組合：0.1%甲酸/甲醇 + Scepter C8-120色譜柱 柱溫80℃
? 考察柱溫：色譜圖對比：40℃→80℃，p.A1del與FLP分離度顯著提升80℃時p.A1del與FLP分離度達峰值，溫度梯度驗證80℃分離效果最優(yōu)。
不同柱溫80°C（①）、70°C（②）、60°C（③）、50°C（④）、40°C（⑤）的色譜圖（0.1%甲酸/甲醇 + Scepter C8-120）
02第二階段：AI驅動參數(shù)優(yōu)化
依據(jù)初篩結果，LabSolutions MD軟件基于AI自動優(yōu)化，即使是非專業(yè)的操作人員依然可以輕松獲得類似于專家級別的優(yōu)化結果：
? 梯度條件：初始濃度5%/10%/15% + 梯度時間5/10/15min
? 流速：0.5/0.6/0.7 mL/min
? 核心結論：初始濃度↑ + 梯度時間↑ → 分離度↑
流速對分離影響較?。ㄔ斍橐娤聢D）
03第三階段：分子量追蹤，破譯相似雜質
LCMS-2050單四極桿質譜實現(xiàn)精準鑒定：如下可看到雜質Met（O2）、p.A1del、p.A1_E2del、p.A1_K3del和p.A1_D5del的紫外光譜之間的相似性大于0.99，這表明基于紫外光譜的峰跟蹤將很難實現(xiàn)。相比之下，LabSolutions MD能夠基于LCMS-2050獲得的分子量進行峰值跟蹤，即使紫外譜圖重疊，分子量差異仍可實現(xiàn)精準追蹤，輕松識別目標分子和雜質。（結果見下圖和下表）
合成肽FLP 及雜質的紫外光譜圖
04最終階段
LabSolutions MD提供了可視化的“分離地圖”，通過設計空間，選定分離所需的條件要求，系統(tǒng)將自動找到最佳的檢測條件（見圖A區(qū)域），得到肽和雜質有效分離的結果。
? 最佳分離結果：初始濃度9% + 梯度時間11.5min + 流速0.6mL/min（點A區(qū)域）
? 最終色譜圖：所有雜質基線分離，總分析時間<7分鐘！
最優(yōu)條件色譜圖（6個峰完全分離，主成分與雜質關鍵分離度為1.63/1.03）
結論
島津Method Scouting System方法開發(fā)系統(tǒng) + LabSolutions MD方法開發(fā)軟件 + LCMS-2050單四極桿質譜聯(lián)用系統(tǒng)，輕松實現(xiàn)超多種色譜條件自動篩選，通過AI驅動梯度優(yōu)化，質譜分子量精準追蹤，顛覆傳統(tǒng)，讓肽類藥物質控方法開發(fā)效率高效提升。
產品信息
島津Method Scouting System方法開發(fā)系統(tǒng) + LabSolutions MD方法開發(fā)軟件 + LCMS-2050單四極桿質譜聯(lián)用系統(tǒng)
島津Method Scouting System方法開發(fā)系統(tǒng)
LabSolutions MD方法開發(fā)軟件
LCMS-2050單四極桿質譜聯(lián)用系統(tǒng)
全流程自動化：從條件篩查、流動相配制到數(shù)據(jù)解析，杜絕人為誤差
智能決策系統(tǒng)：分離度評分自動排名、AI梯度優(yōu)化、設計空間可視化
合規(guī)性保障：符合AQbD（質量源于設計）理念
*文中涉及最優(yōu)，最佳類描述，限于實驗組別對比結果。
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